Серологические реакции в лабораторной диагностике¶

Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, основанные на взаимодействии антигенов и антител in vitro с образованием видимого или регистрируемого прибором комплекса. Они применяются для выявления возбудителей инфекций, определения антител к ним, а также для обнаружения антигенов и антител при неинфекционных заболеваниях. Материалом для исследования служат сыворотка или плазма крови, реже — другие биологические жидкости.

¶Общий принцип

В основе всех серологических реакций лежит специфическое связывание антигена с антителом, которое приводит к образованию иммунного комплекса. Поскольку сам факт связывания невидим, в реакцию вводят один из компонентов в виде, позволяющем наблюдать результат: взвесь клеток, эритроцитов, частиц латекса или меченые молекулы. Результат оценивают визуально (появление хлопьев, осадка, изменения мутности) либо инструментально (по оптической плотности, флуоресценции, радиоактивности).

Различают реакции двух типов: прямые, где определяют неизвестный антиген с помощью известных антител, и непрямые (косвенные), где в исследуемой сыворотке выявляют антитела с помощью известного антигена.

¶Классификация

По механизму и способу регистрации выделяют несколько групп.

¶Реакции преципитации и агглютинации

Реакция преципитации основана на образовании мелкодисперсного осадка (преципитата) при взаимодействии растворимого антигена с антителом. Её варианты — реакция кольцепреципитации и преципитация в геле (метод двойной диффузии по Оухтерлони), применяемая, в частности, для идентификации токсинов.

Реакции агглютинации основаны на склеивании корпускулярных частиц. К ним относятся:

• прямая агглютинация — взаимодействие антител с целыми микробными клетками;
• реакция пассивной (латексной) агглютинации — антиген или антитело предварительно сорбированы на инертных частицах (латекс, эритроциты);
• реакция Кумбса — выявление неполных антител.

¶Реакции с участием комплемента

Реакция связывания комплемента (РСК) основана на том, что комплекс «антиген — антитело» связывает комплемент. Если специфическое связывание произошло, комплемент расходуется и индикаторная гемолитическая система не лизируется. РСК долгое время была основным методом диагностики сифилиса и ряда других инфекций.

¶Иммунологические методы с метками

Современная диагностика опирается на методы с инструментальной регистрацией:

Иммуноферментный анализ (ИФА) — наиболее распространённый метод: он позволяет количественно измерять концентрацию антигенов и антител и легко автоматизируется.

¶Применение

Серологические реакции используют для:

• диагностики инфекционных заболеваний (определение антител класса IgM и IgG, оценка динамики титра);
• идентификации возбудителя по его антигенам;
• определения групп крови и резус-фактора;
• выявления аутоиммунных заболеваний;
• определения гормонов, опухолевых маркёров, лекарственных веществ.

Диагностическое значение имеет не только сам факт наличия антител, но и их класс и динамика титра в парных сыворотках, взятых с интервалом 7–14 дней. Четырёхкратный рост титра подтверждает текущую инфекцию.

¶Ограничения

Серологические методы обладают рядом ограничений. Возможны ложноположительные результаты из-за перекрёстных реакций, а также ложноотрицательные — в ранние сроки заболевания, когда антитела ещё не выработались (серонегативное окно). У иммунокомпрометированных пациентов выработка антител снижена. Поэтому серологию часто дополняют молекулярными методами — прежде всего полимеразной цепной реакцией (ПЦР), выявляющей генетический материал возбудителя напрямую.