Окраска по Романовскому в гематологии¶

Окраска по Романовскому — группа методов окрашивания клеток крови и костного мозга, основанная на совместном действии основных и кислых красителей, образующих нейтральные комплексы. Применяется в гематологии для дифференцировки форменных элементов крови, оценки морфологии эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и паразитов крови.

¶История

Метод разработан в 1891 году русским врачом-терапевтом Дмитрием Леонидовичем Романовским, который установил, что смесь основного красителя (азура) и кислого (эозина) даёт более чёткую и контрастную картину окраски мазков крови, чем применявшиеся ранее односоставные красители. Позднее метод был усовершенствован: в 1902 году немецкий химик Густав Гимза предложил стабильную смесь азур-эозина с глицерином и метанолом, а в 1912 году американский патолог Джеймс Райт создал метанольный вариант красителя. Все эти модификации объединяют под общим названием «окраска по Романовскому» или «романовская окраска».

¶Химические основы

В основе метода лежит взаимодействие двух типов красителей:

• Основные (катионные) красители — азур I, азур II, метиленовый синий. Связываются с кислыми структурами клетки: ядерным хроматином (ДНК, РНК), гранулами базофилов.
• Кислые (анионные) красители — эозин. Связывается с основными (щелочными) белками: гемоглобином, эозинофильными гранулами, цитоплазматическими белками.

Нейтральные комплексы азур-эозина окрашивают структуры, обладающие смешанными свойствами (нейтрофильные гранулы). Распределение красителя зависит от pH среды, поэтому точное соблюдение буферных растворов критично для воспроизводимости результата.

¶Основные модификации

¶Применение в гематологии

Окраска по Романовскому — базовый метод световой микроскопии мазков периферической крови и аспиратов костного мозга. Она позволяет:

• оценивать лейкоцитарную формулу и морфологию нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов, базофилов;
• выявлять аномалии эритроцитов: гипохромию, анизоцитоз, пойкилоцитоз, тельца Жолли, кольца Кебота, базофильную пунктацию;
• диагностировать гемобластозы (лейкозы, лимфомы) по характеру бластных клеток;
• обнаруживать внутриклеточных паразитов — малярийных плазмодиев, трипаносом, бабезий;
• оценивать тромбоциты и их агрегацию.

¶Интерпретация окраски

Цветовые характеристики структур при правильной окраске:

• ядра клеток — тёмно-фиолетовые или синие;
• цитоплазма лимфоцитов — голубая;
• эозинофильные гранулы — ярко-оранжевые или красные;
• базофильные гранулы — тёмно-синие или пурпурные;
• нейтрофильные гранулы — бледно-лиловые;
• гемоглобин эритроцитов — розово-серый.

¶Ограничения

Метод требует свежеприготовленных мазков и стандартизированных реагентов. Артефакты возникают при:

• длительной фиксации или высыхании мазка до фиксации;
• изменении pH буфера (сдвиг в кислую сторону усиливает эозинофилию, в щелочную — базофилию);
• загрязнении красителя или истечении срока годности;
• нарушении времени окрашивания.

Кроме того, романовская окраска не позволяет надёжно дифференцировать некоторые субпопуляции лимфоцитов и бластных клеток — в этих случаях применяют цитохимические, иммунофенотипические и молекулярные методы.

¶Значение

Окраска по Романовскому остаётся наиболее распространённым методом морфологического исследования крови в мире. На её основе построены автоматизированные системы окраски и цифровые анализаторы мазков. Метод включён в стандарты клинических лабораторных исследований и применяется как в рутинной диагностике, так и в научных исследованиях гемопоэза.