Иммуноэлектрофорез и его разновидности¶

Иммуноэлектрофорез — метод анализа белков, сочетающий электрофоретическое разделение компонентов смеси в геле с последующей иммунодиффузией и реакцией преципитации с антителами. Применяется в клинической лабораторной диагностике, биохимии и иммунологии для определения состава и количественных соотношений белков биологических жидкостей.

¶Принцип метода

Метод основан на двух последовательных процессах. Сначала белки разделяются в агарозном или агаровом геле под действием электрического поля в соответствии со своим зарядом и молекулярной массой. Затем в гель вносят антисыворотку, содержащую антитела к определяемым белкам. Антитела диффундируют в гель и при контакте с соответствующим антигеном образуют нерастворимый комплекс «антиген — антитело», видимый как дуга преципитации. Положение и форма дуги зависят от концентрации и электрофоретической подвижности белка.

¶История

Метод предложен в 1953 году французским исследователем Пьером Грабаром и американским иммунологом Кёртисом Уильямсом. Грабар развил технику в серию модификаций, что сделало иммуноэлектрофорез одним из базовых методов иммунохимии XX века. В дальнейшем метод был автоматизирован и адаптирован для количественных измерений.

¶Разновидности

¶Классический иммуноэлектрофорез

Зональный электрофорез в агарозном геле с последующей иммунодиффузией антисыворотки из продольной канавки. Даёт качественную картину распределения белков и широко применялся для анализа сывороточных белков.

¶Ракетный иммуноэлектрофорез

Разработан в 1965 году. Электрофорез проводят в геле, содержащем равномерно распределённые антитела. Образующиеся дуги преципитации по форме напоминают ракеты, высота которых пропорциональна концентрации антигена. Метод позволяет проводить количественное определение белков.

¶Перекрёстный иммуноэлектрофорез

Двумерный вариант: сначала разделение в одном направлении, затем — в перпендикулярном в геле с антителами. Используется для сравнения сложных смесей и выявления гетерогенности белков.

¶Иммунофиксация

Модификация, при которой после электрофореза белки фиксируются антисывороткой непосредственно на мембране или в геле. Применяется в диагностике моноклональных гаммапатий, в частности при выявлении парапротеинов.

¶Иммуноблоттинг

Сочетание электрофоретического разделения белков, их переноса на мембрану и последующей иммунодетекции. Позволяет идентифицировать отдельные белки, в том числе вирусные антигены.

¶Применение

• Диагностика моноклональных гаммапатий и миеломной болезни.
• Оценка белковых фракций сыворотки и мочи.
• Выявление дефицита отдельных классов иммуноглобулинов.
• Исследование антигенного состава микроорганизмов.
• Контроль чистоты белковых препаратов.

¶Ограничения

Метод требует специфических антисывороток, чувствителен к качеству геля и условиям электрофореза. Количественные варианты уступают по точности современным иммунотурбидиметрическим и иммуноферментным методам, однако сохраняют значение для качественного анализа сложных белковых смесей.