Иммунохроматографический анализ: принцип и применение¶

Иммунохроматографический анализ — метод качественного и полуколичественного определения биологически активных веществ, основанный на сочетании хроматографического разделения компонентов вдоль пористой мембраны и специфического связывания «антиген — антитело». Относится к иммунохимическим методам анализа и реализуется в формате тест-полосок, кассет и планшетов, не требующих лабораторного оборудования.

¶Принцип метода

Анализ проводят на нитроцеллюлозной мембране, на которую нанесены реакционные зоны. Жидкий образец наносят на впитывающую подложку; под действием капиллярных сил он движется вдоль полосы. В стартовой зоне находятся меченые конъюгаты — антитела или антигены, связанные с коллоидным золотом, латексом или флуоресцентной меткой. При движении образца происходит связывание целевого аналита с конъюгатом, и образовавшийся комплекс мигрирует к зонам детекции.

На мембране формируют две линии:

• тестовая линия — содержит иммобилизованные антитела (или антиген), захватывающие комплекс; её появление или отсутствие указывает на наличие аналита;
• контрольная линия — фиксирует корректность прохождения жидкости и работоспособность теста независимо от результата.

В зависимости от схемы (конкурентной или «сэндвич») положительный результат проявляется либо появлением, либо исчезновением окраски тестовой линии. Визуальная регистрация занимает от 5 до 20 минут; инструментальный учёт проводят с помощью планшетных ридеров или сканеров.

¶История

Метод сформировался в 1970–1980-х годах на стыке иммунохимии и тонкослойной хроматографии. Ключевую роль сыграли работы по мечению антител коллоидным золотом и создание мембранных носителей с контролируемым капиллярным потоком. Массовое распространение технология получила в 1980-х годах, а с 1990-х стала основой для быстрых тестов в медицине, ветеринарии и контроле качества пищевых продуктов.

¶Разновидности

¶Применение

Основные области использования:

• медицина — экспресс-диагностика инфекций, определение гормонов (например, хорионического гонадотропина при тестах на беременность), маркеров воспаления, наркотических веществ;
• ветеринария — выявление возбудителей заболеваний животных;
• пищевая промышленность — контроль остатков антибиотиков, микотоксинов, аллергенов;
• экология — мониторинг загрязнителей воды и почвы;
• биобезопасность — быстрое тестирование в полевых условиях.

¶Достоинства и ограничения

К преимуществам относят скорость, простоту, низкую стоимость, отсутствие сложного оборудования и возможность применения вне лаборатории. Ограничения связаны с преимущественно качественным характером результата, риском ложноположительных и ложноотрицательных исходов, влиянием состава образца (высокая вязкость, pH, эффект «хук-эффекта» при избытке аналита) и ограниченной чувствительностью по сравнению с иммуноферментным анализом и полимеразной цепной реакцией. Положительные результаты, как правило, требуют подтверждения референсными методами.